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如何修|煉成流式高手 -方案設計(上)
我們時(shí)常會(huì )遇到,明明染色Marker都來(lái)自一篇文獻,但是后實(shí)驗結果卻變成“買(mǎi)家秀與賣(mài)家秀”。
產(chǎn)生這種現象的原因是什么?以及我們?yōu)槭裁匆绾蝺?yōu)化我們的染色方案呢?我們先看具體的例子。
方案1與方案2,所選擇的marker都*一致,所選用的熒光素種類(lèi)一樣,但是搭配不一樣。那么我們看看同一個(gè)樣本,后各個(gè)細胞亞群的結果一樣嗎?
方案1與方案2,CD4+CD25+ 的百分比接近(A與C比較),可是CD8+CD69+的百分比卻相差很多(C與D比較)。
造成這種原因其實(shí)就是我們平時(shí)說(shuō)到到spreading現象。
Nguyen, Richard, et al. "Quantifying spillover spreading for comparing instrument performance and aiding in multicolor panel design." Cytometry Part A 83.3 (2013): 306-315.
如果要優(yōu)化流式染色方案中,由spreading現象產(chǎn)生的分辨率降低,我們可以使用SWOFF方法。通過(guò)如下流程,就可以很快找出究竟是由于那個(gè)通道的配色不合理,導致分辨能力下降。
在不同的檢測平臺,元件的光電轉化效率會(huì )直接影響儀器總體分辨率。
不僅如此,科技的進(jìn)步帶來(lái)的還有更小的spreading現象,這使得配色也更加的輕松,結果也更加的準確。
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