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細胞計數儀知識分享系列 I 鑒定識別篇
上一篇《細胞計數儀知識分享系列 I 性能檢測篇》中，我們發(fā)現全自動(dòng)細胞計數儀在檢測細胞樣品的重復性和梯度稀釋的結果準確性上，都比半自動(dòng)插板式細胞計數儀更有優(yōu)勢。那么大家可能會(huì )問(wèn)：
導致這樣的性能差異原因是什么？
目前市場(chǎng)上許多公司都自詡所賣(mài)的細胞計數儀是全自動(dòng)的，那我們又如何區分哪個(gè)是全自動(dòng)，哪個(gè)是半自動(dòng)？
本文我們將給大家介紹下全自動(dòng)和
半自動(dòng)細胞計數儀性能差異的原因
以及如何快速地鑒別全/半自動(dòng)細胞計數儀
PART 01
全自動(dòng)和半自動(dòng)
細胞計數儀性能差異的原因
首先，我們對臺盼藍染色的圖像法細胞計數儀的檢測過(guò)程做下回顧，下面6個(gè)步驟是細胞計數和活率分析的基本流程。
傳統顯微鏡下手工細胞計數（如下所示），前面5步操作都要操作人員來(lái)手動(dòng)完成。因為人為操作帶來(lái)的誤差不可避免，導致結果差異有時(shí)會(huì )很大，甚至超出通?？梢越邮艿?plusmn;10%偏差范圍。并且隨著(zhù)樣品數越多，操作人員容易造成眼疲勞，無(wú)法繼續進(jìn)行有效并準確地計數。
手工顯微鏡法細胞計數的照片和計算方法
因此，插板式半自動(dòng)細胞計數儀應運而生，它省去了操作人員肉眼觀(guān)察和統計死活細胞數的步驟，但剩下幾個(gè)步驟還需要手動(dòng)完成，包括吸液加樣、臺盼藍染色和上樣分析（有時(shí)還要手動(dòng)對焦），測試結束后需更換新的細胞計數板做下一批樣品。
半自動(dòng)細胞計數儀的三種計數板手動(dòng)加樣照片
相比全自動(dòng)細胞計數儀，半自動(dòng)細胞計數儀存在以下問(wèn)題導致計數結果重復性和準確性要差：
細胞樣品和臺盼藍的體積需要移液槍手動(dòng)定量，而且混勻也是手動(dòng)來(lái)完成，因此不可避免地產(chǎn)生人為操作誤差。
從搖瓶培養的幾十毫升或生物反應器幾十到上百升的細胞樣品中，吸取20-30uL體積的樣品進(jìn)行檢測，由于取樣量少，容易引起取樣代表性差，結果不準確的問(wèn)題。
儀器一般只拍1-3張照片，分析統計的細胞數量相對少，結果的代表性相對較差。
同時(shí)，染色后的細胞樣品通過(guò)移液槍加到計數板上，有時(shí)會(huì )操作不當產(chǎn)生氣泡，特別是細胞培養液中含有較多易產(chǎn)生氣泡的蛋白，這種問(wèn)題更容易發(fā)生。另外，廢棄的細胞計數板還會(huì )產(chǎn)生二次固體污染，這些問(wèn)題目前都沒(méi)有好的解決方法。
那有沒(méi)可能細胞的混懸和染色，以及細胞的計數和分析過(guò)程全部實(shí)現自動(dòng)化，同時(shí)不用手動(dòng)更換新的細胞計數板而自動(dòng)做下一個(gè)樣品呢？答案是使用全自動(dòng)細胞計數分析儀。
PART 02
如何快速鑒別
全自動(dòng)和半自動(dòng)細胞計數儀？
結合細胞計數和活率分析的檢測過(guò)程，除了要放入待檢測的樣品外，全自動(dòng)細胞計數儀可以讓儀器自動(dòng)完成樣品的混懸、臺盼藍染色、細胞拍照和識別、測試結果的分析統計和顯示。
相比半自動(dòng)細胞計數儀，全自動(dòng)細胞計數儀有以下一些特點(diǎn)可供大家快速鑒別。
1. 自動(dòng)混懸和臺盼藍染色
全自動(dòng)細胞計數儀的一個(gè)顯著(zhù)特點(diǎn)是能夠自動(dòng)完成細胞的吹打混懸和臺盼藍染色。
要擁有這個(gè)特點(diǎn)，儀器必須具備下面兩個(gè)功能。
首先，儀器內部要有步進(jìn)馬達，準確控制細胞樣品和臺盼藍等體積混合。
然后，儀器還要可以自動(dòng)混勻染色，能將細胞樣品和臺盼藍進(jìn)行有效地染色處理。
而這兩步操作，對于半自動(dòng)細胞計數儀而言，還只能通過(guò)手動(dòng)操作來(lái)完成。
2.自動(dòng)管路清洗
全自動(dòng)細胞計數儀內部有一個(gè)流通池，可用于流過(guò)的細胞拍照成像，所以就不需要細胞計數板這個(gè)耗材。當樣品檢測結束后，儀器需要自動(dòng)對流通池進(jìn)行清洗，并在清洗結束后將管路內液體切換到對細胞友好的磷酸緩沖液，等待下一個(gè)樣品的檢測。
所以，除了對細胞拍照的光路系統和用于數據控制的電子系統外，相比半自動(dòng)細胞計數儀，全自動(dòng)細胞計數儀還有一個(gè)清洗管路的液路系統，并通過(guò)八通閥的切換完成細胞的染色和管路清洗。因此，一般大家看到的全自動(dòng)細胞計數儀體積會(huì )相對大一些。
全自動(dòng)細胞計數儀檢測原理示意圖和結構組成
3. 高通量和不間斷檢測
全自動(dòng)細胞計數儀的另一個(gè)特點(diǎn)是高通量和不間斷檢測。待測樣品可以先放到轉盤(pán)或96孔板上，根據軟件中設置好的分析條件，儀器會(huì )自動(dòng)按要求分別對這些細胞樣品完成計數和活率分析。
Vi-CELL BLU細胞計數儀的兩種上樣模塊
以貝克曼庫爾特生命科學(xué)Vi-CELL BLU全自動(dòng)細胞計數儀為例，使用轉盤(pán)一次可以放21個(gè)樣品，而使用孔板最多可以放96個(gè)樣品進(jìn)行分析測試。若使用24位轉盤(pán)，在檢測過(guò)程中還可以實(shí)現不間斷上樣測試，即樣品測試過(guò)程中，還可以放入新的待測樣品。所以，在操作便捷性上，全自動(dòng)細胞計數儀也是優(yōu)于半自動(dòng)細胞計數儀。
總之，全自動(dòng)細胞計數儀在細胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來(lái)的誤差，同時(shí)儀器能自動(dòng)清潔管路和過(guò)夜清洗，而且可以高通量上樣和不間斷測試。因此，不管是細胞計數的重復性和準確性，還是儀器操作的便捷性上，全自動(dòng)細胞計數儀都比半自動(dòng)插板式細胞計數儀更有優(yōu)勢。
希望大家可以通過(guò)此文介紹的以上這些特點(diǎn)，在面對琳瑯滿(mǎn)目的細胞計數儀時(shí)，能夠快速有效地鑒別出細胞計數儀是“真"全自動(dòng)還是“假"全自動(dòng)。
除了儀器測試結果的重復性和準確性，對于生物制藥的質(zhì)量控制和生產(chǎn)部門(mén)，儀器軟件的法規符合度也是一個(gè)很重要的點(diǎn)。所以，下一期的細胞計數儀知識分享，我們將為您提供法規符合度方面的內容介紹。
