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當基因編輯遇上自動(dòng)化工作站
基因編輯技術(shù)是指能夠對目標基因進(jìn)行定點(diǎn)“編輯”,例如片段插入、缺失,堿基定點(diǎn)編輯等,實(shí)現對特定DNA|片段的修飾。
基因編輯工具
目前的基因編輯工具主要有鋅指核酸酶(ZFN)、轉錄因子激活樣效應物核酸酶(TALEN)和規律間隔成簇短回文重復序列(CRISPR/Cas)等技術(shù)。CRISPR/Cas系統由于其精準、簡(jiǎn)單、快速、成本低的特點(diǎn),成為目前基因編輯使用較為廣泛的技術(shù)。
以CRISPR系統為例,在使用CRISPR/Cas系統進(jìn)行基因編輯過(guò)程中,需要gRNA來(lái)引導Cas蛋白對基因組進(jìn)行切割,然后再通過(guò)供體兩端的同源片段進(jìn)行同源重組,或利用生物體自身的非同源末端連接進(jìn)行修復。
CRISPR/CAS基因編輯技術(shù)
基因編輯流程
無(wú)論使用哪種工具進(jìn)行基因編輯,都需要構建載體,將基因編輯工具導入到細胞中,然后對細胞進(jìn)行驗證,篩選出被正確編輯的細胞。
以酵母細胞基因編輯為例:
構建載體過(guò)程包含了基因合成或擴增、基因組裝、質(zhì)粒轉化、大腸桿菌培養、質(zhì)粒驗證、測序等步驟。然后將構建好的載體轉入酵母細胞中,其中包含酵母轉化、培養、克隆驗證等步驟。
基因編輯流程長(cháng)、步驟多、需要熟練的操作,耗費了科研工作者大量的時(shí)間和精力,往往是抬頭看文獻、低頭做實(shí)驗,實(shí)驗虐我千百遍,我待實(shí)驗如初戀。
如果可以將基因編輯使用的質(zhì)粒像工業(yè)化生產(chǎn)線(xiàn)上的產(chǎn)品一樣自動(dòng)化生產(chǎn),輸入不同的基因片段,產(chǎn)出相應的質(zhì)粒,然后再將其轉入宿主細胞中進(jìn)行基因編輯,將極大的提高科研以及研發(fā)效率,并且可以使科研人員從實(shí)驗中解放出來(lái),專(zhuān)注于實(shí)驗的設計和數據分析。
自動(dòng)化基因編輯
基因編輯自動(dòng)化流水線(xiàn)需要完成基因擴增、組裝、大腸桿菌轉化、克隆驗證、質(zhì)粒提取、質(zhì)粒轉染、宿主驗證等多種實(shí)驗操作,其中涉及多種儀器設備,如自動(dòng)化液體工作站、酶標儀、克隆挑選機器人、培養箱、PCR儀、離心機、封膜機、撕膜機等。同時(shí),需要一款強大的整合軟件,進(jìn)行儀器調度、資源分配、耗材統籌、數據管理,使實(shí)驗過(guò)程更加的流暢。
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Beckman產(chǎn)品發(fā)布時(shí)間軸
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基因編輯自動(dòng)化系統示例